论文肉制品中致病菌的检测和荧光定量PCR方法，本文是关于定量论文如何怎么撰写和致病菌和肉制品和荧光有关论文范文.
检测肉制品中的致病菌是保障肉制品质量安全、防止食源性疾病爆发的有效手段.PCR 技术作为一种同时检测多种病原菌的技术,是检测肉制品中致病菌的重要手段.此次主题由刘磊老师对肉制品致病菌的各种知识和荧光定量PCR 方法进行讲解.
食源性致病菌及其危害
食源性疾病是指食品中致病因素进入人体引起的感染性、中毒性等疾病,包括食物中毒.据不完全统计,约66%的食源性疾病由食源性微生物引起.据WHO（世界卫生组织）估计,全球每年有数十亿人发生食源性疾病,每年美国大约有7600 万人患食源性疾病.
微生物种类主要分为两类,其一为致腐性微生物,如蜡样芽孢杆菌、枯草杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、铜绿假单胞菌、金葡萄球菌、微球菌、真菌等,其二是致病性微生物,如李斯特菌、沙门氏菌、志贺氏菌、致病性大肠杆菌、链球菌、空肠弯曲菌、副溶血弧菌小肠结肠炎耶尔森菌在人们的日常生活中,肉制品是人体中微生物的一大重要来源.肉制品中的微生物的主要有三方面来源—动物本身由于疾病或者创伤感染引入；屠宰、分割过程中引入的（水、肠道、呼吸道、工具、操作人员、空气,鼠类及蝇虫等）；制作过程中由配料带入.
致病菌限量标准及GB 检测方法
我国关于致病菌的限量标准以国家标准（GB）为主,主要包括GB 4789（检测方法）、GB 29921（致病菌限量标准）、产品标准、卫生规范GB 14811 和接触材料标准.除此之外,还有相关的行业标准（SN）、农业部标准（NY）和地方标准（DB）.肉制品中的国家标准详见表1,肉制品中致病菌的相应标准如表2 所示.
食源性致病菌检测方法及其选择使用
图1 以沙门氏菌为例,解释了食源性致病菌的大致检测流程.
食源性致病菌的检测方法大致可分为三类,即培养法、免疫法、PCR.培养法是致病菌检测行业的金标准,但是比较繁琐,并且检测周期长,同时要求新鲜样本；免疫法同样是行业金标准,但是检测结果存在人为差异；使用PCR 方法具有非特异性干扰的特点,并且检测灵敏度很高.不同的检测需求各自适应着三种检测方法,而每种检测方法也有着选用的适合条件.检测方法的选取大致需要考虑四点,第一,检测样品：检测方法均具有一定的适用范围,例如检测诺如病毒的ELISA 试剂盒适用范围为粪便、制定为检测蔬菜的行标则不适用；又如在沙门氏菌检验中低菌量样品可以一步增菌.第二,检测项目：例如,致泻性大肠杆菌适宜采用PCR 方法检验,金葡肠毒素则适合采用免疫方法检测.第三,样品数量：检测样品数量大、建议采用免疫学方法, 例如ELISA.第四,实验室预算：预算少,可以采用不需要仪器的免疫学方法或者恒温PCR 方法.
MF 荧光定量PCR 产品
实时荧光PCR 是在PCR 反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实现实时监测整个PCR 进程,并对起始模板进行定量分析的方法,而普通PCR 则是借助DNA 电泳对扩增反应的终产物进行半定量及定性分析.实时荧光PCR 与普通RT-PCR 相比,优势在于实时监测（在对数扩增期）而不是重点检测,且其灵敏度更高,需要样品也较少,特异性高,还能够精确定量.此外,实时荧光PCR 无需接触EB 等有害物质,检测过程在密闭的反应管中进行,可以减少对环境中气溶胶的污染,提高检测结果的准确性.
就操作流程而言,MF 荧光定量PCR 产品操作可分为六步—取样、样品前处理、核酸提取（5min）、反应体系配置（预制型）、扩增检测（1.5~2h）、结果判断.从产品优点看,MF 荧光定量PCR 也有六大优势：第一、结果精确：采用独特且高度保守等基因靶序列检测,特异性强,灵敏度高,可达到10~100CFU/ML.第二、操作便捷：一次加样、检测,减少人为误差.第三、检测快速：整个扩增、检测时间1.5~2h.第四、降低污染：封闭的体系中完成扩增和实时测定,大大降低了污染的可能性.第五、精准的控温系统：先进的热电制冷技术,保证超高热循环系统加热,制冷迅速、稳定,多温度控制.第六、试剂盒通用性强：适用于多种荧光定量PCR 仪,不同探针和引物组合.
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参考文献：
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