论文HPLC法测定注射用头孢噻肟钠的有关物质，本文是关于头孢论文如何写和头孢噻肟钠和HPLC和物质方面论文如何写.
摘 要：改进HPLC 测定注射用头孢噻肟钠中有关物质的方法.在美国药典和欧洲药典（英国药典）方法的基础上,优化了两种不同流动相系统,用梯度洗脱对注射用头孢噻肟钠的有关物质进行了分离.结果样品中各成分的分离度及检出灵敏度完全满足有关物质限度的测定要求.改进后的RP HPLC 方法能更加真实有效的反映注射用头孢噻肟钠的有关物质含量,可有效控制产品的质量.
关键词：头孢噻肟钠；有关物质；高效液相色谱法
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津10A 高效液相色谱仪（LC 10ATvp 高压泵,SIL 10ADvp 进样器,SPD M10A PDA 检测器,DGU 14A 在线脱气机）；Milli Q 纯水机（Millipore 公司）.
1.2 药品与试药
注射用头孢噻肟钠（批号0406132）由哈药集团三精制药有限公司提供；注射用头孢噻肟钠（批号050103）由浙江亚太药业股份有限公司提供；注射用头孢噻肟钠（批号050321025）由苏州东瑞制药有限公司提供.甲醇为色谱纯,其余试剂均为分析纯.
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Hypersil Gold（250mm×4.6mm,5μm）；检测波长235nm；流速1.0ml/min；进样体积10μl.
流动相I（梯度洗脱） 流动相A 为0.05mol/L 磷酸盐缓冲液∶甲醇（86∶14）；流动相B 为0.05mol/L 磷酸盐缓冲液∶甲醇（60∶40）.
0.05mol/L 磷酸盐缓冲液的配制 取7.1g 磷酸氢二钠至1000ml 量瓶中,加水溶解至接近刻度,用磷酸调节溶液pH 至6.25,加水定容至1000ml）,梯度洗脱程序见表1.
流动相I（I 等度洗脱） 流动相为磷酸盐缓冲盐∶甲醇（85∶15）.
磷酸盐缓冲液的配制 3.5g 磷酸二氢钾和11.6g 磷酸氢二钠至1000ml 量瓶中,加水溶解至接近刻度,调pH 至7.0,加水定容至1000ml.
2.2 样品溶液的配制
取头孢噻肟钠40mg 至50ml 量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀.
2.3 流动相I 与流动相II 的比较
（1）分离效果的比较 流动相I 流动相I 系统为美国药典分析头孢噻肟钠采用的系统.完全按照流动相I 的梯度洗脱程序,发现主峰与前后相邻的杂质不能很好的分离.针对分离情况,将梯度洗脱程序进行相应调整后,结果分离效果较好,流动相II 为欧洲药典（英国药典）在分析头孢噻肟钠采用的系统.完全按照流动相II 的等度洗脱程序,发现主峰前分离出的杂质个数与流动相I 的相同,但是主峰后的杂质在1h 之内没有出峰.为了缩短分析时间,将主成分出峰后改为梯度洗脱,样品色谱图显示45min 之内可以将主峰后的杂质完全洗脱,（2）最低检出限的比较 两种流动相在同一根色谱柱上得出的头孢噻肟钠的最低检出限基本一致,为100ng.
2.4 系统适应性实验溶液的选择
美国药典中系统适应性实验溶液配制 取1ml 对照品溶液加7ml 水和2ml 甲醇,加25mg 碳酸钠固体混合溶解,室温放置10min,加3 滴冰乙酸,1ml 对照品溶液,混合均匀.欧洲药典（英国药典）中系统适应性实验的溶液配制 取4.0ml 样品溶液加入1.0ml 稀盐酸溶液,40℃加热2h,加5.0mlpH6.6 的缓冲溶液,1.0ml 稀氢氧化钠溶液.
美国药典中的系统适应性溶液是头孢噻肟钠的碱破坏溶液,而欧洲药典（英国药典）中的系统适应性溶液是头孢噻肟钠的酸破坏溶液.从色谱图可以看出,美国药典中的系统适应性实验主要产生一个杂质（杂质1）,产生的杂质数目较少,而欧洲药典（英国药典）中的系统适应性溶液,产生的杂质较多,不仅产生杂质1,而且还产生明显的杂质2、杂质3 和杂质4.从样品的色谱图可以看出,杂质1 在多数样品中是最大杂质,而且样品中也存在与杂质1 相邻的杂质2,与主峰相邻的杂质4在样品中也存在,两对杂质的分离效果是确定色谱条件的关键,因此杂质1 和杂质2 的分离度以及杂质4 和主峰的分离效果可以充分体现色谱系统的分离效果.所以,采用欧洲药典（英国药典）中的系统适应性溶液更能保证色谱条件的分离效果
2.6 三批样品的测定结果
对三批实际样品,采用Hypersil Gold（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱进行有关物质测定,计算方法采用1%对照品对照法.
3 讨论
3.1 色谱柱的选择性
A 型色谱柱 早期色谱柱,无定型或球形硅胶,与B 型相比,硅胶纯度较低,重金属含量较高,键合密度较低,碳载量较低,未采用封尾技术或不完全封尾技术,硅羟基活性较高,残留硅羟基导致的“第二效应”较强,能与碱性（含N 原子）化合物、酸性化合物发生氢键和离子交换作用,造成色谱峰拖尾,但对于某些极性化合物,硅羟基是组分分离的主要因素.B 型色谱柱 球型高纯硅胶,重金属含量相对较低,键合密度较高,碳载量较高,采用非极性基团封尾技术（短碳链烷基）或其它技术,使硅羟基活性较低,能改善碱性（含N 原子）化合物、酸性化合物的分离.
试验结果也充分证明B 型色谱柱色谱峰的拖尾因子要明显小于A 型色谱柱的色谱峰.
3.2 系统适应性实验及梯度洗脱比例的调整
采用欧洲药典（英国药典）的系统适应性溶液,在调整后的USP 色谱系统的HPLC 色谱图中杂质1 和杂质2 的分离度以及杂质4 和主峰的分离情况可以充分体现出色谱系统的分离效果.采用不同色谱柱进行方法粗放性试验,发现有些色谱柱需要对梯度洗脱的 三批注射用头孢噻肟钠样品的有关物质测定结果 程序表进行一些必要的调整才能达到比较好的分离效果.
4 结论
通过对美国药典、欧洲药典（英国药典）中头孢噻肟钠有关物质测定方法的比较,得出美国药典中色谱方法的分离效果和色谱稳定性等方面均优于欧洲药典（英国药典）的方法.有关物质的限度,从本文三批样品的测定结果来看,采用欧洲药典（英国药典）中规定的限度更适合.
参考文献：
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参考文献：
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