论文山慈菇水煎剂对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响，本文是关于细胞类论文范文检索跟山慈菇和胶质瘤和山慈菇水煎剂方面论文范文检索.
【摘 要】目的：研究山慈菇水煎剂对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响.方法：山慈菇水煎剂（200,400,600mg/mL）分别作用于胶质瘤U118细胞0h、24h、48h,分别采用CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验对细胞的增殖、迁移、侵袭能力进行检测.结果：山慈菇水煎剂（200,400,600mg/mL）作用于胶质瘤U118细胞24小时和48小时均能显著降低细胞的增殖能力（P<0.05）,且当山慈菇水煎剂（200,400,600mg/mL）作用于U118细胞48小时,增殖抑制率分别高达20.64%、47.61%、51.23%；划痕实验结果表明,不同浓度山慈菇水煎剂作用24小时及48小时均能明显降低胶质瘤U118细胞的迁移能力（P<0.05）,且48小时药物降低细胞迁移的能力高于24小时；体外侵袭实验显示,山慈菇水煎剂（200,400,600mg/mL）培养24h和48h均能明显的降低侵袭细胞数目,差异具有统计学意义（P<0.05）；结论：山慈菇水煎剂能够减轻U118胶质瘤细胞的增殖、侵袭和迁移能力,但对于其具体的机制还需要进一步的研究.
【关键词】山慈菇水煎剂；胶质瘤细胞；增殖；侵袭；迁移
胶质瘤是一种发病率高、致死率高的恶性脑肿瘤,5年内脑胶质瘤患者的生存率小于10%,该病多发于30岁至40岁的中年人群,其约占中年颅内肿瘤患者的1/3至2/3.胶质瘤侵袭性高,发病机制复杂,对于该疾病还没有完全根治的治疗方法[1].目前,对于脑胶质瘤的治疗,临床上主要采用手术配合术后放化疗为主.放化疗不仅对肿瘤细胞存在杀伤力,对机体内正常的细胞也有很强的杀伤力[2],副作用强,加重患者的不良反应,严重影响患者的生存质量及生活质量[3-5].山慈菇是常用的抗肿瘤中药之一,有解毒消肿的功效,用于痈疽恶疮、淋巴结核和蛇虫咬伤的作用.现代药理研究表明,山慈菇具有抗肿瘤细胞生长、抑制血管生成、抑制肿瘤细胞的侵袭与转移、抗炎等作用.本课题采用山慈菇水煎剂作用于胶质瘤细胞,研究其对该细胞增殖、侵袭和迁移的影响,以期为脑胶质瘤靶向治疗药物的研究提供参考和依据.
1 材料与方法
1.1 药物及制备
U118胶质瘤细胞株由上海复旦大学细胞库提供,山慈菇购自北京同仁堂药店.电子精密天平秤取100g山慈菇药材,根据传统中药煎煮方法进行煎煮.待液体至100mL附近时将其转移至高压灭菌后的烧杯中,并使用无菌培养皿将盛有煎剂的烧杯盖住,浓缩煎剂至50mL.于超净工作台中将水煎剂加入离心管（经高压灭菌处理）中,离心5min,转速为1000r.min-1,取上清.取5μL上清加入1mL无菌DMEM培养基中,置于37℃,5%CO2培养箱中放置48h,观察水煎剂是否染菌.剩余上清密封于4℃保存备用.48h培养后的上清置于显微镜下观察,确认无菌后,此次制备的水煎剂上清（2kg.L-1）原液即可用于后续的实验中.根据实验所需要的水煎剂浓度加入培养基,在超净台中,无菌条件下,稀释至研究所需要的浓度.
1.2 仪器与试剂
CCK-8试剂、碘化丙啶（PI）试剂、DMSO试剂、DAPI试剂、RNA酶、生理盐水和无水乙醇购于Sigma公司；胰蛋白酶购于Hyclone公司；胎牛血清（Fetal Bovine Serum,FBS）、DMEM高糖培养基购于美国Gibco公司；Transwell小室购于美国Corning公司；Matrigel基底膜购于美国BD公司；多功能酶标仪购于美国Mo-lecular Devices公司；倒置显微镜购于日本OLYMPUS公司,CO2培养箱购于德国BINDER公司；细胞培养箱购于美国Forma Scienti.c公司.
1.3 实验方法
1.3.1 人胶质瘤细胞培养
人胶质瘤U118细胞采用含10%FBS（已灭活）的高糖DMEM培养基培养细胞,将细胞置于37℃、5%CO2培养箱中培养,依据细胞具体生长状况,带其长满培养瓶70%~80%时对其进行传代处理,周期约为2天到3天,取对数生长期的细胞用于后续实验研究.
1.3.2 CCK-8实验
细胞增殖情况采用CCK-8方法进行检测.取对数生长期U118细胞,以1×104个细胞每孔接种于96孔板中,置于37℃、5%CO2培养箱中过夜,待其贴壁后加入山慈菇水煎剂（200mg/mL,400mg/mL,600mg/mL）培养24h；另外同样分组,山慈菇水煎剂（200mg/mL,400mg/mL,600mg/mL）作用于细胞48h.待药物作用时间足够,弃去细胞培养液,PBS洗两遍,吸净PBS洗涤液,加入10μL CCK-8试剂,在细胞培养箱中孵育4h,450nm波长处酶标仪测定各孔光吸收值（OD值）.每组实验重复3次,记录数据用于后期统计.增值抑制率（%）等于[（对照组OD值-加药组OD值）/对照组OD值]×100%.
1.3.3 划痕实验
将U118胶质瘤细胞接种于无菌6孔板中,每孔细胞数为2×106个,置于培养箱中,待过夜细胞贴壁后,使用200μL的头划出一条直的划痕,使用PBS将划下来的细胞洗涤干净,加入无血清DMEM培养基,分别加入山慈菇水煎剂（200mg/mL,400mg/mL,600mg/mL）培养0h,24h,48h在显微镜下观察,并拍照记录,本实验重复三次,统计分析山慈菇水煎剂对U118细胞迁移的影响.
1.3.4 体外侵袭实验
在Transwell小室（孔径8μm）上室的底膜表面铺上40μL Matrigel胶,稀释比例为1:3,37℃孵育0.5h.用无血清DMEM培养液稀释对数生长期U118细胞,上室中加入100μL细胞悬液,细胞数2×104个,Transwell小室下室中加入500μL DMEM（含10% FBS）培养液,恒温细胞培养箱培养过夜细胞贴壁后；分别加入山慈菇水煎剂（200mg/mL,400mg/mL,600mg/mL）培养0h,24h,48h,弃去上室培养液,加入甲醇固定0.5h,0.1%结晶紫染色20min,在显微镜下观察,细胞计数,并拍照记录.实验重复3次,用于后期统计分析.
1.4 统计学方法
上述实验均需重复三次,实验获得的数据采用均数&plun;标准差（`x&plun;s）表示.数据采用SPSS 18.0软件进行统计分析,当P<0.05时,差异显著,具有统计学意义.
2 结果
2.1 山慈菇水煎剂对U118胶质瘤细胞增殖的影响
与对照组相比,加入山慈菇水煎剂不同浓度200mg/mL、400mg/mL、600mg/mL培养24h后,U118细胞增殖抑制率分别为12.51%、12.72%、39.28%,24h山慈菇水煎剂作用后细胞的增殖抑制率均明显的高于对照组,差异显著具有统计学意义（P<0.05）；与对照组相比,加入山慈菇水煎剂不同浓度200mg/mL、400mg/mL、600mg/mL培养48h后,U118细胞增殖抑制率分别为20.64%、47.61%、51.23%,48h山慈菇水煎剂作用后细胞的增殖抑制率均明显的高于对照组,差异显著具有统计学意义（P<0.05）,如图1所示.
2.2 山慈菇水煎剂对U118胶质瘤细胞迁移的影响
对照组U118胶质瘤细胞培养24小时,细胞迁移至划痕的中间部分,加入山慈菇水煎剂不同浓度200mg/mL、400mg/mL、600mg/mL培养24h后,相对划痕面积分别为41.12%,68.33%,78.32%,24h山慈菇水煎剂作用后细胞划痕面积均明显的高于对照组,差异显著具有统计学意义（P<0.05）；对照组U118胶质瘤细胞培养48小时后,加入山慈菇水煎剂不同浓度200mg/mL、400mg/mL、600mg/mL培养48h后,相对划痕面积分别为30.12%,42.20%,64.21%,48h山慈菇水煎剂作用后细胞划痕面积明显的高于对照组,差异显著具有统计学意义（P<0.05）,如图2所示.
2.3 山慈菇水煎剂对U118胶质瘤细胞侵袭的影响
由表1可以看出,加入山慈菇水煎剂不同浓度200mg/mL、400mg/mL、600mg/mL培养24h后,侵袭细胞数目均明显的少于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）；加入山慈菇水煎剂不同浓度200mg/mL、400mg/mL、600mg/mL培养48h后,侵袭细胞数目均明显的少于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）；此外,研究还发现,山慈菇水煎剂不同浓度200mg/mL、400mg/mL、600mg/mL作用于U118胶质瘤细胞48h侵袭数目明显的少于24h,差异具有统计学意义（P<0.05）.
3 讨论
中医中肿瘤主要归于“积聚”“痰核”范畴中,其发病可能与癌毒、痰凝、血瘀等相关.痰是构成肿瘤组织的有形成分之一,因其胶着黏腻之.山慈菇具有散结及化痰的作用,因此考虑其可能对于癌症具有治疗作用,且前期的多项研究表明,山慈菇具有抗肿瘤的药理作用,但是对于其具体的机制尚不明确[6].
本研究结果显示,山慈菇水煎剂200mg/mL、400mg/mL、600mg/mL培养24h后,U118细胞增殖抑制率分别为12.51%、12.72%、39.28%,其对细胞的增殖抑制率明显的高于对照组；培养48h后,加药组U118细胞增殖抑制率分别为20.64%、47.61%、51.23%,山慈菇水煎剂作用后细胞的增殖抑制率明显的高于药物作用24h时.加入山慈菇水煎剂不同浓度200mg/mL、400mg/mL、600mg/mL培养24h后,相对划痕面积分别为41.12%,68.33%,78.32%,细胞的迁移能力均明显的低于对照组；对照组U118胶质瘤细胞培养48小时后,相对划痕面积分别为30.12%,42.20%,64.21%,48h山慈菇水煎剂作用后细胞迁移能力均明显的低于细胞培养24h时.
加入山慈菇水煎剂不同浓度200mg/mL、400mg/mL、600mg/mL培养24h后,侵袭细胞数目均明显的少于对照组；加入山慈菇水煎剂不同浓度200mg/mL、400mg/mL、600mg/mL培养48h后,侵袭细胞数目均明显的少于对照组；此外,研究还发现,山慈菇水煎剂不同浓度200mg/mL、400mg/mL、600mg/mL作用于U118胶质瘤细胞48h侵袭数目明显的少于24h.
综上所述,山慈菇水煎剂200mg/mL、400mg/mL、600mg/mL作用于胶质瘤细胞24小时和48小时均能降低细胞的增殖、侵袭和迁移能力,且随着作用时间的延长,药物浓度的增加,药物的抗增殖、侵袭和迁移的能力均增加,对于具体的机制,还需进一步的研究.
（通讯作者：张璐萍）
参考文献
[1]郭淳,龚永杰,孙放等.山慈菇水煎剂对人乳腺癌T-47D细胞增殖和迁移的影响[J].中医学报,2017,32(10):1832-1835.
该文总结,这篇文章为适合不知如何写山慈菇和胶质瘤和山慈菇水煎剂方面的细胞专业大学硕士和本科毕业论文以及关于细胞论文开题报告范文和相关职称论文写作参考文献资料.
参考文献：
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